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今天，就让我们聚焦于双抗分子，看看如何针对双抗分子展开高效的效价测定工作！
罗氏制药收购的基因泰克公司于2022年1月28日宣布，FDA已批准使用Vabysmo (faricimab-svoa) 治疗湿性或新生血管性年龄相关性黄斑变性 (nAMD) 、糖尿病性黄斑水肿 (DMF) 、视网膜静脉阻塞 (RVO) 患者，它是首款获FDA批准用于眼部的双特异性抗体。
早在2014年，罗氏研发中心就围绕faricimab展开了其效价测定方案的研发工作。接下来，让我们重温经典，一起来看看具体的实验设计及数据吧！
实验设计
芯片：CM5
实验步骤：捕获法（偶联VEGF蛋白；抓取不同浓度的双抗，60 s；接着进样Ang-2抗原，30 s，1 μg/mL）
方法模板：连续进样模式
实验流速：5 μL/min
缓冲液：HBS-N（偶联）；PBS-T（运行）
再生液：10 mM Gly，pH=2.0
图1：使用Biacore搭建faricimab的效价测定方案
实验结果
01
确定faricimab的进样条件及数据分析模型
在图1实验方案中，R1数值代表了faricimab针对VEGF的结合活性，而R2信号值取决于结合在VEGF芯片上的双抗数量及真实活性。
为探究faricimab在此效价测定方案中的浓度依赖现象，研究人员在Injection 1中，选择上样0.35 μg/mL-30 μg/mL的双抗，Injection 2中的Ang-2抗原保持30 s，1 μg/mL的实验参数，结果如图2所示，R2信号随着faricimab的进样浓度增加呈S曲线趋势，当faricimab的进样浓度高于10 μg/mL时，R2信号呈负增长趋势。因此，在后续的实验中，faricimab的进样浓度低于10 μg/mL。
为探究precision、accuracy、linearity与specificity等性能参数，研究人员选择了slope-ratio、parallel-ratio模型进行了数据采集及分析工作。同时，也选择了parallel line model进行数据采集及分析，具体见图3。
在图1实验方案中，R1数值代表了faricimab针对VEGF的结合活性，而R2信号值取决于结合在VEGF芯片上的双抗数量及真实活性。
为探究faricimab在此效价测定方案中的浓度依赖现象，研究人员在Injection 1中，选择上样0.35 μg/mL-30 μg/mL的双抗，Injection 2中的Ang-2抗原保持30 s，1 μg/mL的实验参数，结果如图2所示，R2信号随着faricimab的进样浓度增加呈S曲线趋势，当faricimab的进样浓度高于10 μg/mL时，R2信号呈负增长趋势。因此，在后续的实验中，faricimab的进样浓度低于10 μg/mL。
为探究precision、accuracy、linearity与specificity等性能参数，研究人员选择了slope-ratio、parallel-ratio模型进行了数据采集及分析工作。同时，也选择了parallel line model进行数据采集及分析，具体见图3。
图2：Faricimab在不同浓度条件下时，R1/R2信号的变化情况
图3：R2的浓度依赖情况（A: Parallel line model; B: Slope-ratio model）
02
验证方案的适用性及特征参数
研究人员使用了60-140%活性浓度的标准品，测试了此实验方案的linearity、accuracy、precision等参数，具体数据如表1。
表1：60-140%活性浓度的标准品测定得到的特征参数结果
在文章中也提及了faricimab双抗是由VEGF、Ang-2特异性抗体组成的，所以研究人员也分别用单型亲本抗体进行了特异性测试，也设置了不同的处理条件（例如pH、温度），探究不同抗体的活性变化情况，结果见图4。看图可以发现单型亲本抗体或同型对照相较参考品，均没有信号响应，而经过处理后的抗体的活性则有不同程度的降低，即可充分证明此效价测定方案具有强特异性。
图4：抗体在不同条件下的活性检测情况
在此篇方法开发类文章中，我们看到了诸多流程示意图及实验图谱。研究人员搭建的效价测定方案中，采用了最佳的实验参数及数据分析模型。最终线性相关性R2=0.9997，准确性97%，偏差2%。
相较传统的终点检测法（例如ELISA），Biacore在开展相关实验方案的制定时采用了在线测量方式，无需把实验分割成多步实验去完成，减少了可变量因素。同时，Biacore采用了label-free检测方式，检测信号与芯片表面质量的变化呈正相关关系，所以无需对检测样本做预标记处理，降低了实验复杂度及样品消耗。
看完以上内容，例如蛋白、多抗、核酸、多糖、病毒颗粒等，Biacore能助力相关的检测方案建立，助力研发成果的转化，加速药物的上市进度。大家如若对Biacore设备应用进展或对实验方案设计有特定的需求，欢迎随时与我们联系！