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在金膜之上，NTA芯片的羧基化葡聚糖表面上修饰了NTA（次氮基三乙酸），NTA加Ni2+赋予其“捕获”功能，而未完全修饰的羧基基团则赋予其“偶联”的功能。使用“捕获”功能，可以得到特异性、可逆的捕获芯片，而同时使用“捕获”+“偶联”，就可以牢固地偶联His标签配体蛋白，且不需低pH缓冲液稀释。一张芯片，“双重”身份。
捕获：
NTA可通过螯合Ni2+，特异性捕获His标签蛋白，进一步检测此His标签蛋白与其他分子（无His标签）的动力学/亲和力检测等实验，实现可逆捕获检测实验。
图1：使用NTA芯片捕获法检测His标签配体-分析物
Biacore提供成熟的NTA芯片及配套试剂盒，包含了实验中会用到的螯合及再生试剂。控制软件中选择Kinetics/affinity using Sensor Chip NTA（Insight software of 1 series and 8 series & Control software of S200，X100及T200在Kinetics/affinity-芯片类型选择NTA即可）即可开展实验。具体实验流程包括：
1
General：芯片表面螯合Ni2+；
2
Capture：捕获His标签配体 (Ligand in running buffer) ；
3
Analyte：进样分析物，检测与配体的结合和解离过程。单循环实验中，可以在此步设置中一个循环设置多个浓度，直接得到浓度梯度的结果；
4
Regeneration：用EDTA洗去Ni2+及配体。
整个循环结束后，芯片回归到初始状态，可以用于其他His标签配体的检测。需要注意的是，分析物不可以有His标签，否则会直接结合在Ni2+上，影响检测结果。
熟悉His标签的老师可能会问：必须用EDTA再生么？当然不是。Kong et al. 使用NTA捕获法检测14–3-3ζ蛋白与化合物的结合时，化合物与靶点蛋白可以完全自发解离（快解离），因此不设置再生[1]；Lu et al. 使用NTA捕获法检测膜蛋白A2AR与化合物的结合，使用5 mM theophylline再生洗掉分析物而保留配体[2]。
捕获+偶联：
今年Cell杂志上发表的以Clp蛋白酶为靶点的新型抗结核病BacPROTACs研究成果，就是使用NTA芯片说明书中的Capture & Coupling的方法，检测ClpC3与天然抗生素或HBPs (Homo BacPROTACs) 的结合[3]。
图2：NTA芯片Capture & Coupling后，单循环检测ClpC3与药物的亲和力
“捕获”+“偶联”可使His标签配体蛋白稳定地共价结合在芯片。区别于CM系列芯片，NTA芯片并不通过静电吸附达到富集的目的，而是利用Ni2+与His标签的特异性结合，所以配体分子不需要使用低pH的醋酸钠缓冲液，用运行缓冲液稀释即可。
在Biacore控制软件中选择Immobilization-芯片类型选择NTA-add step-NTA Amine（Insight software of 1 series and 8 series， X100、T200及S200可在偶联方法中自定义偶联方法）即可开展实验。具体实验流程包括：
1
General：芯片表面螯合Ni2+；
2
Activation：EDC/NHS活化；
3
Capture：捕获His标签配体 (Ligand in running buffer) ，同时发生捕获和偶联。除了设置配体进样时间外，Biacore特有的Aim for target level模式，无需紧盯偶联信号，不用担心偶联多了、少了，只需要输入想要的偶联量，仪器自动调整进样时间，准确达到目标偶联量。精准偶联So Easy；
4
Deactivation 1：乙醇胺封闭；
5
Deactivation 2：用EDTA洗去Ni2+。
图3：NTA芯片捕获+直接偶联，target模式下自动完成目标偶联量
NTA-Amine实验结束后，His标签配体分子被牢牢地偶联在芯片上，等同于CM系列芯片的氨基偶联。后续的动力学/亲和力检测可按照实验需求，设置结合解离及再生步骤，再生并不会洗掉配体。值得注意的是，偶联完成后芯片上没有了Ni2+，所以分析物有无His标签都可检测。