最开始的CAR-T只有CD3z作信号段，CAR-M借用的也是CD3z，最近有篇文章，给CAR-M加料了信号段，整理分享之，具体内容如下：

一代CAR-T只有一个CD3z信号段，效果差些，所以有了添加CD28或4-1BB的二代CAR-T（上图来源于网络）

从二代CAR-T发散到CAR-M上，一代CAR-M只有CD3z信号段，TLR4可促进巨噬细胞促炎作用，作者计划借用TLR4胞内信号段，构建二代CAR-M，使新的CAR-M趋向M1亚型（上图来源于网络）

CAR设计：没有信号段、只有一个CD3z或TIR、同时有CD3z和TIR

先给多能干细胞iPSC装上CAR，然后诱导分化成CAR-巨噬细胞

CAR表达情况

iPSC在不同分化阶段，TLR4相关基因表达量不同，早期表达高，所以后面选分化早期的CAR-M进行实验

构建表达EGFRvIII的靶细胞

CAR-M可识别结合靶细胞，而后将其吞噬

CAR-M可杀靶细胞：可以看到，12h差异不大，但到24h，TIR信号段CAR-M效果优于CD3z信号段CAR-M

TIR信号段CAR-M响应靶细胞分泌更多细胞因子

同时有两个CD3z、TIR信号段利于某些细胞因子表达

同时有两个CD3z、TIR信号段利于细胞因子分泌

同时有两个CD3z、TIR信号段的CAR-M选择性杀靶细胞能力最强（U87MG、HepG2是EGFRvIII阴性的对照细胞）

CAR-M、靶细胞共培养体系中再加入T细胞，看T细胞激活，CD3z、TIR双信号段的CAR-M介导T细胞激活的能力最强（HLA-NY是阳性对照）

CD3z、TIR双信号段的CAR-M高表达M1 marker，低表达M2 marker，更趋向M1亚型

开始体内，CD3z、TIR双信号段的CAR-M效果更好

体内，也是CD3z、TIR双信号段的CAR-M更趋向M1亚型

另一体内模型，再做，依然是CD3z、TIR双信号段的CAR-M效果更好

又做了靶向GPC3的CAR-M    

CD3z、TIR双信号段的CAR-M体外高效杀靶细胞HepG2（U87MG是GPC3阴性的对照细胞）

体内，CD3z、TIR双信号段的CAR-M效果好

和CD47单抗联用

前面是人的CAR-M，又做了小鼠的CAR-M

小鼠CAR-M体外吞靶细胞

 小鼠CAR-M体内抑制肿瘤生长

CAR-M在肿瘤微环境中趋向M1亚型，调动NK、T细胞

          TIR信号段的引入驱动了下游基因RELA的表达（左侧示意图来源于网络）

TLR4被激活后，另一个重要的分子事件是NFkB核转位（上图来源于网络）

有TIR信号段的CAR-M响应靶细胞，NFkB发生核转位，暗示CAR-M的TIR信号被成功调动

          JSH23抑制NFkB后，CAR-M杀靶细胞被显著抑制，暗示依赖NFkB信号

利用单细胞测序技术继续挖掘引入TIR信号段给CAR-M带来的利好

单细胞测序数据也发现，双信号段段CAR-M M1 marker CD80、CD86表达更高，M2 marker CD206表达低

双信号段CAR-M M1相关基因水平高

双信号段CAR-M M2相关基因水平低

  最后，肿瘤细胞是怎么死的呢？发现和CAR-M共培养后，凋亡相关基因水平升高，暗示发生了凋亡

          验证测序结果，CAR-M诱导肿瘤细胞凋亡，双信号段效果最好

抗体阻断TNF后，CAR-M诱导肿瘤细胞凋亡的作用受限，暗示依赖TNF诱导凋亡

巨噬细胞可以通过胞葬作用给凋亡细胞收尸，可以看到CAR-M“吞了”肿瘤细胞

      吞的过程，综合起来，CAR-M通过TNF诱导肿瘤细胞凋亡，而后通过胞葬作用“收尸”

总图

对于实体瘤，巨噬细胞先天具有浸润到肿瘤部位的优势，因此CAR-M实体瘤疗法不容忽视，我们之前整理分享过不少相关文章【CNS文献分享】嵌合抗原受体巨噬细胞（CAR-M）、用纳米颗粒在体内制备CAR-M、LNP递送mRNA体内制备CAR-M、敲掉ACOD1助力CAR-M。

参考文献：

Anhua Lei, Hua Yu, Shan Lu, Hengxing Lu, Xizhong Ding, et al. A second-generation M1-polarized CAR macrophage with antitumor efficacy [J]Nature Immunology, 27 November 2023.